AQP^TM-SNP/InDel分型通用試劑盒

1. AQP^TM-SNP/InDel分型通用試劑盒簡介

AQP^TM基因分型系統又稱等位基因特異的定量PCR基因分型系統（Allele-Specific Quantitative PCR based genotyping assay, AQP），是一種PCR擴增技術與定量PCR技術結合形成的基因分型系統。該系統采用終點法讀取熒光值，能夠對SNP、插入或缺失變異位點進行檢測，具有很大的靈活性，檢測成本低，特別適用于大批量篩選項目，例如植物育種研究和藥物基因組研究。

AQP^TM基因分型系統對應的分型試劑由兩部分構成：1. SNP位點特異的擴增引物（SNP-Specific Primers）：由兩個等位基因特異的正向引物(Allele-specific forward primers)和一個通用反向引物(Common reverse primer)組成；2. HiGeno 2x Probe Mix預混液：包含PCR擴增和產生熒光信號所需的熒光探針。

2. AQP^TM-SNP/InDel分型檢測原理

AQP?基因分型試劑使用一種通用的熒光報告系統，該熒光報告系統能夠生成儀器可識別的與基因型相匹配的熒光信號。

AQP?基因分型系統包含有兩個競爭性的等位基因特異的正向引物和一個通用反向引物（圖1A）。兩個正向引物3'末端存在單堿基的差異，5'端分別帶有不同的接頭序列（圖1A紅色和藍色部分）。HiGeno 2x Probe Mix中包含有兩個不同的熒光探針，兩個探針的5'端分別標記有FAM和HEX熒光基團，中間特定堿基帶有特異的淬滅基團，3'端序列則分別與正向引物5'端接頭序列互補；通過發夾結構，探針的熒光基團與淬滅基團相互靠近，在PCR無擴增情況下，淬滅基團吸收熒光基團的發射光，檢測不到熒光信號（圖1B）；HiGeno DNA Polymerase是一種高保真的熱啟動DNA聚合酶(圖1C)，在堿基存在錯配的情況下不能對DNA模板進行有效擴增。

圖1. AQP?基因分型系統組分。

   當PCR擴增反應啟動時，等位基因特異引物結合在目標SNP的上游，其3'端堿基位于SNP位點。如果SNP位點是雜合的，則兩個引物將結合到相應DNA模板上，而如果SNP位點是純合的，則僅一個特異引物或另一個特異引物將結合到DNA模板上。同時，通用的反向引物將結合到互補鏈的SNP位點下游（圖2II）。隨著PCR擴增反應的進行，等位基因特異的正向引物接頭序列會整合到SNP的上游，形成具有接頭序列的PCR產物（圖2Ⅲ）。在后續PCR擴增中，探針識別接頭序列，作為引物進行擴增，形成具有熒光信號的PCR產物（圖2V）。如果SNP位點的基因型是純合的，則僅會生成一種可能的熒光信號，而如果SNP位點是雜合的，則結果將是混合的熒光信號（圖2VI）。

圖2. AQP^TM基因分型系統原理。Ⅰ, DNA模板；Ⅱ, SNP特異引物擴增；Ⅲ, SNP特異引物擴增產物；Ⅳ, 探針擴增；Ⅴ, 熒光標記產物；Ⅵ, 熒光值讀取和SNP分型分析。

3. AQP^TM-SNP/InDel分型試劑盒訂購信息